فرآیند آزمایش
- نمونه را میتوان هم به طور مستقیم و هم بعد از کشت در یک محیط غیرانتخابی به پلیت های محیط کشت تلقیح کرد.
- پلیت ها را به مدت ۴۸-۱۸ ساعت در دمای ۳۷-۲۵ درجه سانتی گراد گرماگذاری کنید.
نتیجه و تفسیر
پپتون ژلاتین منبعی غنی از ویتامین ها، نیتروژن و کربن در این محیط کشت است. منیزیم کلراید و پتاسیم کلراید تولید پایوسیانین و فلورسین را افزایش می دهند. وجود cetrimide به عنوان یک دترجنت کاتیونی و عامل انتخابی در محیط بوده که باعث خارج شدن نیتروژن و فسفر از سلول های باکتریایی به غیر از سودوموناس می شود. بنابراین باکتری های به غیر از Ps.aeroginosa قادر به تحمل این عامل میکروب کش نیستند. گلیسرول نیز به عنوان منبع کربن در این محیط بکار برده می شود.
پس از گرماگذاری، کلنی های رشد کرده را زیر نور فرابنفش با طول موج کوتاه (۲۵۴ نانومتر)، قرار داده و از نظر وجود فلورسین بررسی کنید. همچنین بررسی چشمی وجود رنگ زرد- سبز مایل به آبی کلنی ها نشان دهنده تولید رنگدانه پایوسیانین می باشد. هردو ماده یعنی فلورسین و پایوسیانین بطور اختصاصی توسط سویههای باکتری Ps .aeroginosa تولید می شود. دقت داشته باشید که برخی از سویه های Ps. aeroginosa ممکن است در این محیط کشت رشد نکنند یا حتی ممکن است رشد کرده ولی پیگمان پایوسیانین را تولید نکنند. برخی دیگر در صورت عدم تولید پایوسیانین، نور فلورسنس را نشان خواهند داد.
نکته
- دقت داشته باشید که نوع پپتون استفاده شده در این محیط کشت، در روند تولید پیگمان توسط aeroginosa تاثیر می گذارد.
- هیچ نوع محیط کشتی نمی تواند وابسته به تولید تمامی پیگمان های این باکتری باشد.
- گاهی اوقات برخی از باکتری های روده ای می توانند باعث زرد شدن ملایم محیط کشت شوند ولی این تغییر رنگ به راحتی از فلورسین قابل شناسایی است به دلیل اینکه این رنگ زرد فلورسنس ندارد.
- برخی باکتری های غیر تخمیر کننده و یا اسپورزای هوازی بر روی این محیط پیگمان زرد مایل به قهوه ای محلول در آب تولید می کنند. سویه های سراشیا گاهی با پیگمان صورتی رنگ مشاهده می شوند.
- تحقیقات نشان داده است چنانچه کشت سودوموناس برای مدت کوتاهی در دمای اتاق نگهداری شود خاصیت فلورسنس خود را از دست می دهند اما در صورت گرماگذاری مجدد پلیت، این توانایی باز خواهد گشت.
