توبرامایسین یک آنتی بیوتیک آمینوگلیکوزیدی است. این آنتی بیوتیک با اتصال برگشت ناپذیر به زیرواحد 30S ریبوزوم باکتریایی، سنتز پروتئین را مهار می کند. فعالیت این آنتی بیوتیک بیشتر باکتری های گرم منفی مانند سویه های Staphylococcus، Streptococci، E. coli، Enterobacter، Serratia، Pseudomonas، Citrobacter، Aeromonas hydrophilia، Klebsiella و .. را تحت تاثیر قرار می دهد.