Triple Sugar Iron (TSI) Agar | تی اس آی

فرآیند آزمایش

• محیط کشت TSI را مطابق با دستورالعمل گفته شده در لوله تهیه کنید.
• نمونه مورد نظر را بصورت سطحی و عمقی در لوله کشت دهید.
• درب لوله ها را بصورت نیمه باز بسته و در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت در شرایط هوازی گرماگذاری کنید.

نتیجه و تفسیر

• پس از دوره گرماگذاری، واکنش نمونه های مجهول را با سوش های استاندارد مقایسه کنید.
• واکنش تخمیر قند در این محیط با زرد شدن رنگ محیط مشخص می شود. چنانچه قسمت انتهایی محیط کشت زرد شود (واکنش اسیدی) ولی قسمت شیبدار محیط قرمز شود (واکنش بازی)، نشان دهنده این است که باکتری فقط قادر به تخمیر گلوکز می باشد.
• چنانچه کل محیط کشت در لوله زرد شده باشد به این معنی است که باکتری قادر به تخمیر گلوکز، لاکتوز و یا سوکروز می باشد.
• در صورتی که کل محیط کشت در صورت قرمز رنگ باقی بماند، نشان دهنده وجود باکتری غیر تخمیر کننده قند خواهد بود.
• تولید هیدروژن سولفید در این محیط با سیاه رنگ شدن انتهای محیط کشت در لوله نمایان شده و تولید گاز با بالا آمدن محیط کشت و یا ترک خوردن آن مشخص می شود.

نکته

• تولید هیدروژن سولفید بر روی محیط Kligler Iron Agar ممکن است نسبت به محیط TSI بهتر قابل تشخیص باشد. تحقیقات نشان داده است که مصرف سوکروز توسط باکتری ها در محیط TSI می تواند باعث سرکوب شدن واکنش های آنزیمی برای تولید هیدروژن سولفید شود. همچنین تمامی گونه های سالمونلایی H₂S مثبت قادر به تولید هیدروژن سولفید در محیط TSI نمی باشد.
• افزودن سوکروز به محیط کشت TSI برای محدود کردن برخی باکتری های تخمیر کننده سوکروز که قادر به تخمیر لاکتوز نمی باشند مانند گونه های پروتئوس و سیتروباکتر صورت می گیرد.
• برای شناسایی قطعی و دقیق تر میکروارگانیسم ها بایستی تست های بیوشیمیایی و تایپینگ های سرولوژیک نیز انجام شود.
• هنگام کشت دادن باکتری بر روی این محیط کشت، نباید از لوپ استفاده شود زیرا در صورت کشت عمقی، آگار ترک خورده که باعث ایجاد نتیجه مثبت کاذب برای تولید گاز می شود.
• برای کشت باکتری ها بایستی از کشت تازه استفاده کرد. در صورت استفاده از کشت های مخلوط (چند کلنی)، نتایج غیر قابل اعتمادی بدست می آید.
• درب لوله ها بایستی نیمه باز باشند. در این صورت تبادل هوا بخوبی صورت گرفته و شرایط واکنش های قلیایی بر روی قسمت شیبدار مهیا تر می شود.