توضیحات
آماده سازی محیط
- قوطی حاوی پودر محیط کشت ویولت رد بایل آگار را به خوبی تکان دهید. مقدار ۳۹/۵ گرم از محیط را در ۱ لیتر آب مقطر حل کنید.
- حرارت دهید تا بجوشد و کاملا حل شود. محیط را بیشتر از ۲ دقیقه آن حرارت ندهید چون باعث کاهش ویژگی حمایتی آن در رشد می شود.
- محیط را اتوکلاو نکنید. از حرارت دادن بیش از حد محیط خودداری کنید.
- محیط را تا دمای ۵۰-۴۵ درجه سانتی گراد خنک کنید و بلافاصله استفاده کنید.
شرایط نگهداری
پودر محیط داخل قوطی کاملا در بسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.
آزمایش
آزمایش
فرآیند آزمایش
- از این محیط بیشتر در روش پور پلیت استفاده می شود. به این طریق که ۱ میلی لیتر از نمونه داخل پلیت ریخته می شود. سپس ۱۰ میلی لیتر از محیطی که جوشانده شده و سپس تا دمای ۵۰-۴۵ درجه سانتی گراد خنک شده به پلیت اضافه می شود.
- پلیت را بچرخانید تا نمونه و محیط کشت به خوبی مخلوط شوند. بگذارید آگار محیط به خوبی بسته شود.
- پس از بستن آگار، آن را در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت گرماگذاری کنید. برای محصولات لبنی بهتر است گرماگذاری در دمای ۳۱-۳۰ درجه سانتی گراد انجام شود.
نتیجه و تفسیر
باکتری های تخمیرکننده لاکتوز (کلیفرم ها و E. coli) تشکیل کلنی هایی قرمز-ارغوانی، همراه یا بدون مناطق رسوبی قرمز رنگ در اطراف آن می دهند.
انتروکوک ها و احتمالا Klebsiella، کلنی هایی صورتی رنگ با نوک سوزنی ایجاد میکنند و کلنی مربوط به باکتری های لاکتوز منفی بی رنگ خواهد بود. برای شناسایی دقیق نوع باکتری کلنی های قرمز رنگ باید تست های تاییدی انجام شود.
نکته
- میتوان از لایه پوششی بر روی محیط بسته شده نیز برای افزایش اختصاصیت محیط کشت استفاده کرد. به این ترتیب که یک لایه از محیط ذوب شده بر روی مخلوط محیط کشت و نمونه که کاملا بسته شده اضافه شود و تا قبل از گرماگذاری کاملا ببندد. در اینصورت دمای گرماگذاری بستگی به نوع میکروارگانیسم هدف خواهد داشت.
- امکان دارد محیط VRBA به طور کامل از رشد میکروارگانیسم های گرم مثبت جلوگیری نکند. بنابراین بهتر است از رنگ آمیزی گرم و تست های بیوشیمیایی برای شناسایی دقیق کلنی های جداسازی شده استفاده شود.
- در محیط کشت VRBA، علاوه بر انتروباکتریاسه، سایر باسیلهای گرم منفی نیز رشد می کنند. برای تعیین دقیق گونه و سویه باکتری باید از تست های بیوشیمیایی استفاده شود.
- پلیت های این محیط کشت را بیشتر از ۲۴ ساعت گرماگذاری نکنید چون در این صورت میکروارگانیسم هایی که در این مدت قادر به رشد در محیط نبوده اند، شروع به رشد خواهند کرد.
- بهترین عملکرد این محیط هنگامی حاصل می شود که ظرف مدت ۲۴ ساعت تهیه و استفاده شود.